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DpnI识别并酶切DNA双链中腺嘌呤N6位甲基化(N6-methyladenine)的GATC序列。DpnI识别位点中两个腺嘌呤的N6位都甲基化时，呈现正常的酶活力；只有一个腺嘌呤的N6位甲基化时，酶切活力会降低约60倍。

在37℃，50μL反应体系中反应1小时，将1μg的λDNA完全分解的酶量定义为1个活性单位，即1U。

组分	500U	2.5kU	10kU	50kU
DpnI(10U/μL)	50μL	250μL	1mL	5mL
10×Buffer Y	1mL	1mL	4mL	20mL

保存：-20℃，有效期1年。


10mM Tris-HCl(pH7.4@25℃)，300mM NaCl，1mM DTT，0.1mM EDTA，0.5mg/mL BSA，50% glycerol。


1×Buffer Y：
33mM Tris-乙酸(pH7.9@37℃)，10mM乙酸镁，66mM乙酸钾，0.1mg/mL BSA。

• 内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
  
• 如果发现预期的酶切位点不能切开，请确认特定位点是否已经被甲基化。
  
• 酶切和连接效率：50倍过量的本内切酶消化1小时，>70%被酶切的pBR322 DNA片段可以重新连接，这些片段>95％可以被重新酶切(recut)。

• 单酶切：
  
  • 参考如下反应体系进行：
    

    成分	用量
    待酶切DNA	不超过1μg
    双蒸水或Milli-Q水	适量
    10×Buffer Y	2μL
    DpnI	0.5～1μL
    总体积	20μL

    • 请注意把Buffer和水等充分混匀后再加入内切酶，加入内切酶后可以用枪吹打或轻轻Vortex混匀。
  • 37℃孵育1小时或更长时间。
    
    • 通常参考上述条件孵育1小时已经足够，但多孵育数小时甚至孵育过夜也不会产生负面影响。如果酶切较长时间甚至酶切过夜，可以使用更少量的酶。待酶切DNA量较大时，可以适当延长酶切时间或按比例放大酶切体系。
• 双酶切或多酶切时，需选择适当的可以兼容两个或多个内切酶的缓冲液，然后参考上表设置反应体系。如果没有合适的缓冲液可以选择，可以在一种酶消化完毕后进行纯化，纯化完毕后再进行另外一种酶切反应。

从dam⁺(Dam甲基化酶表达阳性)大肠杆菌菌株如DH5α等提取的质粒的GATC序列中腺嘌呤N6位被甲基化，从而可以被DpnI识别和酶切；而从dam^-(Dam甲基化酶表达阴性)大肠杆菌菌株如JM110等提取的质粒的GATC序列中腺嘌呤N6位没有被甲基化，从而不能被DpnI识别和酶切(参考图1)。

图1.DpnI酶活性检测结果图。
A．分别用从JM110菌株(dam^-)和DH5α菌株(dam⁺)中提取的质粒400ng，在20μL酶切体系中，分别加入或不加入10U的DpnI，37℃酶切1小时，然后电泳分析。图中可见从DH5α中提取得到的甲基化质粒可以被DpnI完全消化，而对于从JM110中提取得到的非甲基化质粒没有任何非特异性的酶切作用。
B．取图A中各酶切产物5μL分别转化DH5α感受态细胞然后涂板，培养过夜。图中可见从DH5α中提取得到的甲基化质粒被DpnI消化1小时后，不会产生任何克隆，进一步验证了DpnI在1小时内可以完全消化甲基化的质粒，并确保本制品可以用于质粒点突变。
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